میکروسکوپ اسکن لیزری چند فوتونی

میکروسکوپ اسکن لیزری چند فوتونی

با مهندس شکوفه ساتری

یک سیستم میکروسکوپ ثابت LSM 710 NLO (Carl Zeiss MicroImaging GmbH، آلمان) برای تصویربرداری MPM استفاده شد. وضوح نوری 0.5 میکرومتر جانبی و 1.5 میکرومتر محوری بود. دو لیزر NIR پالس fs قابل تنظیم مختلف (80 مگاهرتز) برای تحریک استفاده شد. نمونه‌های بافتی LN1P، LN2P، LN3P و LN4D با استفاده از Mai Tai DeepSee (Spectra-Physics، Newport Corporation) تصویربرداری شدند، در حالی که InSight X3 (Spectra-Physics، Newport Corporation) برای LN5D، LN6P، LN7 D، LN9D و، استفاده شد. LN10D. طول موج تحریک برای هر دو لیزر روی 780 نانومتر تنظیم شد تا فلورسانس خودکار را هدف قرار دهد، و تنظیم توان برای تولید یک سیگنال فلورسانس مشابه بهینه شد. از دو لنز شیئی غوطه‌وری در آب Plano-Apochromatic × 20/1.0 (WD 1.9 میلی‌متر) استفاده شد، یا با اصلاح شیشه پوششی 0.17 میلی‌متری روی نمونه‌های نصب شده با ژل اولتراسوند (LN1P، LN2P، LN4P، LN5D، LN6P، LN8D7). و LN10D) یا بدون اصلاح (LN3P، LN9D). فلورسانس از بافت در محدوده انتشار 410 تا 690 نانومتر با استفاده از یک آشکارساز GaAsP بسیار حساس غیرداسکن شده جمع آوری شد. تفاوت در نصب نمونه به دلایل عملی ایجاد شد و مشخص نشد که تا حد زیادی بر ویژگی های مورفولوژیکی مشاهده شده تأثیر بگذارد. در هر تحقیق یک فرآیند استاندارد ثبت تصویر اعمال شد. هم پشته های z و هم کاشی ها به دست آمد. پشته های Z توسط مجموعه ای از 10 تصویر در گام های 5 میکرومتر تا عمق ~50 میکرومتر ارائه شد. میدان دید تصاویر 420 × 420 μm بود و کاشی ها از تصاویر متوالی تا 5× 5 mm تشکیل شده بودند. زمان جذب برای هر تصویر 5 ثانیه بود. معرف ترین داده ها در نتایج و داده های تکمیلی ارائه شده است.