پاکسازی بافت برای تصویربرداری با توان بالا و وضوح بالا از ماکروبیومولکول ها

تجسم بیومولکول ها در بافت پاک شده (الف) تصویربرداری از واحد محیط نوروفیلامنت (NF-M) و آنتی‌بادی‌های زیرواحد 1 گیرنده GABAB در بافت پاک‌شده و منبسط شده. نوارهای مقیاس، [خطای پردازش ریاضی]. (ب) - (ج) پوشش تصاویر رنگ آمیزی شده چند دور. نوار مقیاس، [خطای پردازش ریاضی]. پانل (الف) از Ref اقتباس شده است. 32; پانل های (b) و (c) از Ref. 33.

پاکسازی بافت برای تصویربرداری با توان بالا و وضوح بالا از ماکروبیومولکول ها

پروتکل‌های بافت‌شناسی کلاسیک برای برچسب‌گذاری برش‌های بافت ثابت اغلب شامل مرحله‌ی کم‌آبی بدن و به‌دنبال آن «ترخیص» است. در فرآیند کم آبی، آب حذف شده و با الکل (اتانول) جایگزین می شود. در فرآیند پاکسازی، از یک عامل پاک کننده (اغلب متیل سالیسیلات) برای جابجایی اتانول استفاده می شود و در عین حال مولکول های چربی را نیز حذف می کند که بافت را از نظر نوری شفاف می کند. در علوم اعصاب، این پروتکل ها به طور گسترده در ترکیب با میدان روشن و میکروسکوپ اپی فلورسانس برای تجزیه و تحلیل مورفولوژیکی، به عنوان مثال، برای بازسازی درختان دندریتیک و آکسون در انواع مختلف سلول های عصبی استفاده شده است. بخش هایی برای نفوذ مواد شیمیایی در سراسر. علاوه بر این، انقباض ناهموار مقاطع سریال مانع از دوخت بخش ها به حجم می شود. اخیراً، انتقال به حلال‌های آلی به عنوان راهی برای افزایش ضخامت نمونه پیشنهاد شده است که بازسازی حجمی را ممکن می‌سازد. علاوه بر این، این حلال ها باعث سفید شدن فلورسانس درون زا شدند و ماهیت سمی و خورنده آنها به تجهیزات و جابجایی تخصصی نیاز داشت. به عنوان یک جایگزین، از محلول های آبی با ضریب شکست بالا برای جلوگیری از سفید شدن استفاده شد اما شفافیت کافی برای نمونه های ضخیم به دست نیامد (در مرجع 31 بررسی شده است).

در سال 2013، توسعه CLARITY 5، روشی برای ایجاد حجم زیادی از بافت از نظر نوری شفاف و قابل نفوذ در ماکرومولکول با استفاده از یک هیدروژل ساخته شده از درون، بافت شناسی مغز را متحول کرد. این روش زمینه را برای توسعه خانواده رو به رشدی از ابزارهای پاکسازی بافت با ترکیب هیدروژل متفاوت، از جمله ابزارهایی که می توانند به طور مکرر بافت مغز را منبسط و کوچک کنند، در حالی که مولکول های ماکروبیومولکول های هدف را حفظ می کنند، شکسته است. این روش‌ها امکان تجزیه و تحلیل با توان بالا بیان FP در مقیاس بزرگ را فراهم می‌کنند و همچنین از رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی چندگانه با دورهای زیادی از برچسب‌گذاری و جداسازی آنتی‌بادی فلورسنت پشتیبانی می‌کنند (شکل 2).