الکتروفیزیولوژی و اپتوژنتیک

الکتروفیزیولوژی و اپتوژنتیک

ضبط‌های الکتروفیزیولوژیکی از نورون‌های هیپوکامپ DIV8-DIV12 که با کانال‌ها/پمپ‌های دارای نور در DIV3 ترانسفکت شده‌اند، انجام شد. کشت ها به یک محفظه تصویربرداری سفارشی، سازگار با مرحله موتوری، در محلول خارج سلولی (در میلی متر: 148 NaCl، 2.4 KCl، 2) منتقل شدند.

الکتروفیزیولوژی و اپتوژنتیک چندوجهی با Patch-Silvertrode a، شماتیک دستگاه پچ-سیلورترود یکپارچه با فیبر و طراحی آزمایشی. ب، نمونه‌ای از ضبط پچ گیره تمام سلولی که در داخل بدن با دستگاه Patch-Silvertrode از یک سلول هرمی CA1 از یک موش صحرایی به دست آمده است. یک تزریق جریان درون سلولی (Iinj.، گام 500 میلی‌ثانی؛ پایین) برای برانگیختن فعالیت اسپکینگ از سلول وصله‌شده استفاده شد و سنبله‌های مربوطه در ضبط خارج سلولی توسط الکترود حلقه‌ای که در بالا توضیح داده شد مشاهده شد (n = 3 ضبط با دستگاه‌های ساخته شده مستقل) . کادر قرمز چین‌دار به بخشی از ردیابی نشان‌داده‌شده در قسمت داخلی در یک مقیاس زمانی گسترده اشاره دارد. ج، ردیابی هایی برای ضبط کنار سلولی که در داخل بدن از یک سلول هرمی CA1 موش در طول فعالیت خود به خودی به دست آمده است (n = 6 ضبط با دستگاه های ساخته شده مستقل). فعالیت چند واحدی را می توان از محل ضبط حلقه خارج سلولی (بالا) مشاهده کرد. مقیاس زمانی توسعه‌یافته داخلی منطقه با کادر قرمز چین نشان داده شده است که مطابقت بین پتانسیل‌های عمل ثبت‌شده کنار سلولی و خارج سلولی را در طول یک رویداد سنبله پیچیده نشان می‌دهد. د، تصاویر نوک پیپت با نوری با طول موج های مختلف که از نوک آن ساطع می شود تا به اختلالات اپتوژنتیکی موضعی دست یابد (سمت چپ). تصویر دستگاه Patch-Silvertrode یکپارچه در طول تحریک اپتوژنتیک در داخل بدن (راست). e، کالیبراسیون تحریک اپتوژنتیک با استفاده از موش های Vglut2cre::Ai32 با پالس کوتاه (100 میلی ثانیه) انجام شد که با افزایش توان لیزر اندازه گیری شده از نوک پیپت تحویل داده شد. نقاط سیاه نشان دهنده تعداد سنبله های ایجاد شده در هر آزمایش است (n = 20 کارآزمایی از 4 آزمایش مستقل). نمودار جعبه مجاور داده های خلاصه برای هر توان لیزر را نشان می دهد که در آن انتهای جعبه s.e.m است. و میانگین یک نقطه سیاه است که با خط فیروزه ای متصل می شود. f، سری آزمایشات تحریک نوری (1-5). آثار خارج سلولی به دست آمده از کانال حلقه (سمت چپ) و سنبله های کنار سلولی ثبت شده همزمان (راست) نشان داده شده است. ردیابی ها فیلتر شدند (0.3-3 kHz) تا عکس مصنوع حذف شود و شکل موج پتانسیل عمل برجسته شود، که قابلیت اطمینان فعال سازی نوری را نشان می دهد. n = 10 سلول از 6 دستگاه مختلف (در مجموع 9 دستگاه شامل ضبط کل سلول) برای ضبط کنار سلولی و تحریک اپتوژنتیک در موش.

الکتروفیزیولوژی و اپتوژنتیک چندوجهی با Patch-Silvertrode a، شماتیک دستگاه پچ-سیلورترود یکپارچه با فیبر و طراحی آزمایشی. ب، نمونه‌ای از ضبط پچ گیره تمام سلولی که در داخل بدن با دستگاه Patch-Silvertrode از یک سلول هرمی CA1 از یک موش صحرایی به دست آمده است. یک تزریق جریان درون سلولی (Iinj.، گام 500 میلی‌ثانی؛ پایین) برای برانگیختن فعالیت اسپکینگ از سلول وصله‌شده استفاده شد و سنبله‌های مربوطه در ضبط خارج سلولی توسط الکترود حلقه‌ای که در بالا توضیح داده شد مشاهده شد (n = 3 ضبط با دستگاه‌های ساخته شده مستقل) . کادر قرمز چین‌دار به بخشی از ردیابی نشان‌داده‌شده در قسمت داخلی در یک مقیاس زمانی گسترده اشاره دارد. ج، ردیابی هایی برای ضبط کنار سلولی که در داخل بدن از یک سلول هرمی CA1 موش در طول فعالیت خود به خودی به دست آمده است (n = 6 ضبط با دستگاه های ساخته شده مستقل). فعالیت چند واحدی را می توان از محل ضبط حلقه خارج سلولی (بالا) مشاهده کرد. مقیاس زمانی توسعه‌یافته داخلی منطقه با کادر قرمز چین نشان داده شده است که مطابقت بین پتانسیل‌های عمل ثبت‌شده کنار سلولی و خارج سلولی را در طول یک رویداد سنبله پیچیده نشان می‌دهد. د، تصاویر نوک پیپت با نوری با طول موج های مختلف که از نوک آن ساطع می شود تا به اختلالات اپتوژنتیکی موضعی دست یابد (سمت چپ). تصویر دستگاه Patch-Silvertrode یکپارچه در طول تحریک اپتوژنتیک در داخل بدن (راست). e، کالیبراسیون تحریک اپتوژنتیک با استفاده از موش های Vglut2cre::Ai32 با پالس کوتاه (100 میلی ثانیه) انجام شد که با افزایش توان لیزر اندازه گیری شده از نوک پیپت تحویل داده شد. نقاط سیاه نشان دهنده تعداد سنبله های ایجاد شده در هر آزمایش است (n = 20 کارآزمایی از 4 آزمایش مستقل). نمودار جعبه مجاور داده های خلاصه برای هر توان لیزر را نشان می دهد که در آن انتهای جعبه s.e.m است. و میانگین یک نقطه سیاه است که با خط فیروزه ای متصل می شود. f، سری آزمایشات تحریک نوری (1-5). آثار خارج سلولی به دست آمده از کانال حلقه (سمت چپ) و سنبله های کنار سلولی ثبت شده همزمان (راست) نشان داده شده است. ردیابی ها فیلتر شدند (0.3-3 kHz) تا عکس مصنوع حذف شود و شکل موج پتانسیل عمل برجسته شود، که قابلیت اطمینان فعال سازی نوری را نشان می دهد. n = 10 سلول از 6 دستگاه مختلف (در مجموع 9 دستگاه شامل ضبط کل سلول) برای ضبط کنار سلولی و تحریک اپتوژنتیک در موش.